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  • OCI-AML2细胞技术硬人急性髓系白血病 "

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    培养细胞真的不难,最关键几点:

    1.所有的东西使用最好的,如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的,真的很难相信你会把细胞养坏。

    2.动作要快,胰酶消化,换液什么,细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外,要掌握好胰酶消化时间,所谓的细胞状态差,很多时候是传代的原因。

    3.有时间的话,需要细胞计数,传相应数目的细胞到培养皿中,可以大致清楚细胞的生长曲线,不会临时要处理,手足无措。

    4.要做什么心里要非常清楚,合理安排时间,细胞房的实验穿插进行,可以节省很多时间,也不会耽误别人的实验。

    5.个人的实验器具自己收一套,不要和别人混用,最近换了什么新的东西稍微记一下,试剂一旦怀疑污染,马上丢。

    6.细胞房不能进去太多人,避免相互干扰。

    每天对待细胞比孝敬爹妈还用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丢了,培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?

    1.严格无菌操作,多喷喷酒精,要是对灭菌的东西不放心,自己包自己送自己烘干。

    2.不要和别人共用试剂耗材,自己准备一套。

    3.有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。

    4.水浴锅很脏,生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏,勤换(灭菌水加进去)。

    5.晚上离开的时候最好给细胞房照紫外,超净台是用完就开。

    6.最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。

    养了几年细胞,说一点自己培养细胞方面的看法:

    1.培养细胞前,可以看看细胞特点说明书,包括细胞正常生长的状态图、传代、培养基的类型等。

    2.不同细胞生长周期不同,有的生长很快,比如说MDA-MB-231,传代的时候取离心悬液的十分之一就已经足够了,有的又是特别慢,等的人心焦,BT474就是,传代是一分二,复苏起始的时候两周多才能长满,所以就要在培养细胞的过程中多多摸索了。

    3.对于娇弱的细胞,就得细心呵护了,胰酶消化不能过久,吹得时候要轻柔,离心时候也要注意转速和时间,每天都要去看一下细胞,肉眼观察培养基状况、显微镜下观察细胞生长状况。

    4.冻存细胞复苏后第二天最好更换一次培养基。

    5.培养箱隔一段时间彻底用酒精棉擦洗一次。

    6.养细胞最大的教训:不能偷懒!

    细胞虐我千百遍,我待细胞如初恋。

    1.不管买的细胞、惠赠的细胞,刚拿到手赶紧做两件事:检测是否有支原体污染; 迅速扩增冻存。

    2.发现有污染迅速处理掉,特别是当你养了很多种细胞时; 细菌污染,真菌污染很容易发现,支原体污染的话,细胞会长的慢,买个支原体检测的kit定期检测一下。

    3.细胞房日常的值日清洁是必须的,此外还要定期熏蒸。

    4.细胞的传代一定要规律,保持相同的confluency和传代时间间隔,不要随心所欲或者拖延。

    5.注意个人卫生。" "

    细胞接收操作说明:请仔细阅读本操作说明及相应的细胞说明书。

    本公司细胞发货有四种形式:T25培养瓶(一般是贴壁细胞使用,悬浮细胞也可以)、离心管(悬浮细胞使用多,当然,有些公司也会用这种离心管形式发贴壁细胞,但是,长期经验来说,贴壁细胞容易发生形态变化,估计是细胞培养空间狭小,血清不足导致(最主要是怕运输延误导致这些情况发生),个人不建议用离心管形式发贴壁细胞)及干冰(冻存细胞用,主要是冬天天气冷,温度低于4℃的地方,都要考虑冻存细胞)。

    T25培养瓶:是用T25细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后,拆开包装T25培养瓶的自封袋,不拆封口膜,表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态(有条件可以拍下此时细胞照片)。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上,再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用,如细胞密度高于80%,可以直接消化传代,相反则加入5-6ml培养基放回培养箱继续培养即可。

    离心管:是用15ml离心管发货的形式,只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上,再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用(如果实验室没有T25培养瓶,可以暂时T75 培养瓶,加入10-15ml培养基,,建议10ml培养基,也可以使用T175 培养瓶,加入50-60ml培养基,培养瓶越大,需要的培养基越多。当然如果刚接收到细胞密度不够的话,最好不用大瓶子,先用小瓶子养起来再换大的,不然会长得很慢,严重的,会导致细胞死亡等危险),平衡完成后,离心(1000rpm,3min)收集细胞,弃上清,用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中,放回培养箱继续培养。

    干冰:是用本公司冻存液冻存细胞后,直接用干冰将冻存的细胞冷冻发货的形式。收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。

    接收细胞相关问题:如不能在收到细胞后及时操作细胞,T25及离心管发货的细胞将可以消毒后在37度过夜,血清发货的细胞在室温下静置1-2天(注意不要放冰箱),干冰发货的可以在确认干冰未完全升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱,若干冰完全升华,请即刻复苏细胞。

    T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境,同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁,此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞,可以收集上清后离心(1200rpm,5min)后,将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。

    部分细胞在运输过程中,由于不断震荡及环境不适,可能导致细胞破碎死亡,从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下,平衡后,贴壁细胞用PBS洗两遍再加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可;悬浮细胞可以离心(1000rpm,3min)收集细胞,并用PBS重悬后再离心一次,再用新的培养基重悬并接种细胞。" "

    从最基础的地方教起,一步一步详细介绍细胞培养技术,非常好的开门教程

    常用设备

    准备室的设备:单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、

    高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品柜(放置消毒过的物品)、包装台。

    配液室的设备:扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)。

    培养室的设备:液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)。

    必须放在无菌间的设备:离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。

    无菌操作

    无菌室的灭菌:

    定期打扫无菌室:每周打扫一次,先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等,然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。

    CO2孵箱(培养箱)灭菌:先用3‰新洁尔灭擦拭,然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙酸,再用紫外灯照射

    实验前灭菌:打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟

    实验后灭菌:用75%酒精(3‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。

    实验人员的无菌准备:

    肥皂洗手。

    穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋

    用75%酒精棉球擦净双手。"

  • 公司简介

      公司位于美丽的苏州工业园区。毗邻阳澄湖大道,地理位置优势,交通极为便利。

      公司是以生产、销售、服务为一体的综合性企业并通过了ISO 9000质量保证体系认证。 公司自成立以来积极吸取国内外先进的生产技术,并与南京航空航天大学、航天航空科研机构联合协作致于新技术、新产品的研发。

      公司注重开拓国内、国外两个市场,与数十家国内知名企业建立了广泛、密切的交流合作关系,及时引进美国、英国先进的生产技术,并得到了业内的广泛 认可。服务于神龙汽车有限公司、东风康明斯发动机股份有限公司、潍柴动力股份公司、济南重汽发动机有限公司、熙迈机械制造有限公司、乔治费歇尔汽车产品有 限公司、合肥江淮铸造有限公司。总部业务覆盖江苏、湖北、安徽、山东、山西、湖南、河南等地。

      公司致力于解决铸造件、粉末冶金件等因其微孔缺陷而发生泄漏的问题,在真空浸渗、表面处理、密封领域和铸件缺陷挽救领域,投入大量精力进行研发,技术不断创新,采用科学的管理方式、优质的原材料、先进的生产设备进行生产活动,产品在世界上处于领先地位。

      公司除了生产销售有机浸渗剂、分离剂、刷镀液和合金粉末之外,还拥有二十多年的浸渗加工经验和三十多年铸件缺陷挽救经验。

  • 价格: 面议

    联系:邓林

    电话:18273828434

    地址:苏州工业园区展业路28号3栋E4厂房